Метод леффлера

Содержание
  1. Бактериоскопический метод исследования
  2. Суть бактериоскопического метода диагностики
  3. Необходимые для исследования материалы
  4. Ход исследования
  5. Методы окраски образца
  6. Метод Грама
  7. Метод Циля-Нильсена
  8. Метод Леффлера
  9. Бактериологический метод
  10. Бактериоскопия анализов кала
  11. Бактериоскопия анализов мочи
  12. Бактериоскопия мокроты
  13. Подведем итоги
  14. Серебрение по морозову
  15. Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза
  16. Серебрение по Морозову
  17. Метод Здродовского
  18. Метод Грея
  19. Окраска хламидий
  20. Окраска по Шенку
  21. Метод Петрука
  22. Метод Нейссера
  23. Цвет бактерий, грамположительные и грамотрицательные бактерии
  24. Окрашивание бактерий
  25. Простое окрашивание
  26. Комбинированные (сложные) методы окрашивания
  27. Окраска по Граму
  28. Окраска по Цилю-Нельсену
  29. Метод Пешкова
  30. Окраска по Леффлеру
  31. Естественная окраска колоний микроорганизмов
  32. Липохромы
  33. Продигиозин
  34. Бактериофлуоресцин
  35. Медицинская энциклопедия – значение слова Леффле́ра Метод Окра́ски
  36. Смотреть значение Леффле́ра Метод Окра́ски в других словарях
  37. Посмотреть в Wikipedia статью для Леффле́ра Метод Окра́ски
  38. Как выявить синдром Леффлера | Справочник медицинской лаборатории Оптимум (Сочи, Адлер)
  39. Причины развития синдрома Леффлера
  40. Симптомы заболевания и первые признаки
  41. Методы диагностики
  42. Лечение
  43. Профилактические меры

Бактериоскопический метод исследования

Метод леффлера

Для исследования анализов на предмет наличия в них тех или иных бактерий используются различные способы диагностики, в том числе и бактериоскопический метод. Особенности подобного метода, а также бактериологического метода исследования, будут рассмотрены в этой статье.

Суть бактериоскопического метода диагностики

Бактериоскопический метод исследования образца предназначен для выявления микроорганизмов в исследуемом веществе, а также для подробного изучения свойств этих микроорганизмов, уточнении их количества и поведения в рассматриваемой среде.

Достоинствами этого способа изучения анализов являются простота, быстрота проведения и доступность. Он может быть проведен практически в любой лаборатории с использованием минимального количества инструментов и химических реактивов.

К его недостаткам можно отнести невозможность получения полной картины поведения микробов.

Необходимые для исследования материалы

Для изучения анализов по бактериоскопическому методу необходимы следующие инструменты:

  1. Металлическая петля.
  2. Предметное стекло. Этот предмет обязательно должен быть чист, так как любое его загрязнение может повлиять на состояние образца.
  3. Пинцет.
  4. Фильтровальная бумага.

Очистка новых предметных стекол производится с помощью 1%-ного раствора соды. После кипячения в таком растворе стекло промывается дистиллированной водой, слабым раствором соляной кислоты, а затем снова дистиллированной водой.

Бывшие в употреблении стекла очищаются в несколько этапов: сначала их помещают в раствор серной кислоты на 60-120 минут, затем кипятят в растворе соды, после чего производится промывка стекла водой.

После этого стекло опускают в медицинский спирт.

Хранить приборные стекла нужно либо в спирте, либо в плотно закрытых емкостях. Причем в последнем случае стекла должны быть сухими.

Для данного исследования также понадобятся следующие химические реактивы:

  • Спирт;
  • Раствор Люголя;
  • Красители.

Наиболее часто используемыми красителями являются фуксин Циля, метиленовый синий и карболовый генцианвиолет. Последний краситель представляет из себя раствор обычного фуксина в пятипроцентной карболовой воде

Ход исследования

Исследовать культуру можно как в первозданном, так и в окрашенном виде.

В последнем случае как колонии микроорганизмов, так и одиночные бактерии будут мертвы, что позволяет лучше ознакомиться со строением этих простейших организмов.

При исследовании препарата в его первозданном виде, в свою очередь, лаборант получает больше информации об активности микробов. В обоих случаях препарат рассматривается при помощи микроскопа.

Окрашивание среды проводится в два этапа, сначала препарат подготавливают к процедуре и только затем его окрашивают. Подготовка образца проходит следующим образом:

  1. Образец, предназначенный для исследования, равномерно распределяется по приборному стеклу в форме круга или овала. При наличии в материале посторонних примесей (к примеру, гноя) перед добавлением исследуемого образца на стекло наносится 1-2 капли воды.
  2. После этого получившийся мазок следует высушить.
  3. Как только мазок высохнет, его необходимо зафиксировать с помощью пламени из горелки.

Для фиксации таким образом приборное стекло трижды проводится над пламенем. Если мазок зафиксирован достаточно прочно, то лаборант, проводящий эксперимент, почувствует жжение в пальцах.

По окончании данной процедуры проводится окрашивание образца.

Методы окраски образца

Окрашивание может быть простым, с использованием одного красителя. И сложным, при котором с целью точной дифференциации клеток бактерий по тем или иным их характерным признакам последовательно наносятся на образец несколько различных окрашивающих химических реагентов. Примером сложного окрашивания может служить методы Грама и Циля-Нильсена.

Метод Грама

Метод Грама позволяет определить химический состав клеточной мембраны. Благодаря этому методу была введена классификация бактерий по Граму: грамположительные бактерии (к которым относятся возбудители многих болезней) после окраски приобретают темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – характерный красный оттенок. Метод Грама состоит из следующих этапов:

  1. Сначала препарат обрабатывают раствором Люголя на протяжении одной минуты.
  2. После обработки люголем образец обесцвечивают с помощью спирта.
  3. Затем препарат промывают дистиллированной водой и дополнительно окрашивают фуксином.

Метод Циля-Нильсена

Метод Циля-Нильсена применяется для определения кислоточувствительных бактерий, в клеточных мембранах которых содержится большое количество липидов, к примеру, возбудителей туберкулеза. Работа по данному методу проводится в пять этапов:

  1. На предметное стекло накладывают фильтровальную бумагу, на которую затем наносят небольшое количество фуксина Циля.
  2. Затем предметное стекло нагревают до появления характерного пара. После появления пара стеклу дают остыть. Данную процедуру повторяют еще два раза, после чего снова дают остыть стеклу.
  3. После этого дистиллированной водой смывают фуксин с приборного стекла, предварительно убрав бумагу.
  4. Затем стекло помещают в раствор соляной или серной кислоты до полной утраты образцом цвета.
  5. Наконец, на обесцвеченный препарат наносят раствор метиленового синего, стекло промывают дистиллированной водой и дают ему высохнуть для дальнейшего рассмотрения получившегося препарата под микроскопом.

Рекомендуем прочитать! Перейдите по ссылке:  Исследование мочи на туберкулёз

Метод Леффлера

В число простых методов окрашивания входит метод Леффлера. При нем все бактерии приобретают синий цвет. Работа по данному методу проводится в два шага:

  1. На мазок кладется фильтровальная бумага, на которую наносится раствор метиленового синего Леффлера. В таком состоянии препарат оставляется на 3-5 минут.
  2. По прошествии данного промежутка времени препарат промывается водой и высушивается, после чего его можно исследовать под микроскопом.

При бактериоскопическом методе окрашиваются как минимум два препарата, причем один из них окрашивается простым методом, а один – сложным.

Бактериологический метод

Зачастую при исследовании анализов возникает необходимость определить чувствительность патогена к тому или иному препарату. В этом случае проводится исследование образца по бактериологическому методу. Данный способ состоит из следующих этапов:

  • Сперва необходимо очистить культуру с целью выявить конкретные виды микробов. Для этого образец нужно поместить в среду, в которой развитие бактерий, которые нужно выявить, наиболее вероятно. Также возможно механическое разделение биоматериала при его посеве.
  • После получения чистой культуры, взятые из нее образцы исследуются с помощью бактериоскопического метода.

Ниже приведены примеры сред, используемые для выявления микроорганизмов:

  • Среда Эльшнига, состоящая из одной трети лошадиной сыворотки и двух третей бульона.
  • Сыворотка Леффлера, которая используется для выявления возбудителей дифтерии. Такая среда состоит из трех четвертых сыворотки лошадиной или бычьей крови и одной четвертой бульона с содержанием 1% глюкозы.
  • Кровяной агар, используемый для выявления стрептококков и проверки их чувствительности к воздействию антибактериальных препаратов. Данная среда состоит из 5-10% сыворотки крови животных и агара.

Бактериоскопия анализов кала

Для бактериоскопического исследования анализа кала необходим образец анализа пациента. Если необходимо провести анализ микрофлоры кишечника, нарушения в составе которой свидетельствуют о наличии дисбактериоза или инфекционных заболеваний пищеварительной системы, забор образца проводится с помощью петли, которая вводится в анальное отверстие примерно на 10 сантиметров вглубь.

При исследовании образца кала могут быть обнаружены следующие опасные микроорганизмы:

  • Стафилококки.
  • Клебсиелла, наличие которой свидетельствует о поражении толстой кишки.
  • Синегнойная палочка, выделяющая крайне опасные для человека токсины.

Наличие синегнойной палочки в организме человека может привести к заражению крови и менингиту – заболеваниям, которые могут иметь летальный исход.

Бактериоскопия анализов мочи

Анализ мочи для бактериоскопического исследования сдается при подозрении на воспаление мочевыделительной системы и наличие таких болезней, как пиелонефрит и цистит, возбудителями которых являются кишечная палочка и некоторыми возбудителями заболеваний, передающихся половым путем, соответственно. Для такого исследования необходимо от 50 до 100 мл мочи, причем моча должна храниться в стерильном контейнере. Перед сдачей анализа необходимо хорошо подмыться, чтобы в моче было меньше сторонних примесей. Не рекомендуется сдавать мочу во время менструации.

Бактериоскопический анализ мочи незаменим для обнаружения заболеваний мочевыделительной системы у грудных детей. В этом случае моча собирается через катетер в стерильную емкость. Исследование образца мочи необходимо провести в кратчайшие сроки, иначе обнаружение возбудителей заболеваний будет затруднено.

Бактериоскопия мокроты

При анализе мокроты исследуются два мазка. Один из них изучается на предмет наличия палочек Коха – возбудителей туберкулеза. По результатам исследования второго делаются выводы о наличии в мокроте других микробов.

Для анализа мокроты на туберкулез проводится окрашивание образца по методу Циля-Нильсена.

Для анализа на предмет наличия других микробов образец окрашивают по методу Грама. С помощью бактериоскопического метода с применением окрашивания по методу Грама возможно выявление пневмококка – бактерии, являющейся причиной пневмонии.

[attention type=yellow]

Также при работе с образцом по такой схеме можно выявить наличие в мокроте стрептококков – возбудителей ангины, а также золотистого стафилококка. Последний микроорганизм представляет особую опасность для здоровья человека.

[/attention]

Он провоцирует гнойные процессы и образование абсцессов, в том числе и на внутренних органах.

Подведем итоги

Бактериоскопический метод диагностики является одним из основных методов исследования в микробиологии. Несмотря на его недостатки, данный метод широко применяется в современной медицине для диагностики самых разных заболеваний, некоторые из которых, к примеру, туберкулез, представляют особую опасность для человека.

Источник: https://ChahotkiNet.ru/diagnostika/analizy/bakterioskopicheskij-metod

Серебрение по морозову

Метод леффлера

За 1-2 суток до употребления готовят про­траву, состоящую из 1 мл насыщенного спиртового раствора ос­новного фуксина, 10 мл 20% , 5,5 мл насыщенного на холоду водного раствора сульфата закисного аммиачного железа (соль Мора). Перед употреблением фильт­руют.

Препарат, приготовленный на покровном стекле, фикси­руют и помещают на часовое стекло. Наливают протраву и 30-50 с подогревают до отхождения паров. Дав стеклу остыть, его промывают водой и, поместив на другое часовое стекло, красят фуксином Циля 2-3 мин при слабом подогревании.

После тща­тельной промывки и высушивания препарат готов для микроско­пирования.

Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в розово-красный цвет (рис.18).

Окраска риккетсий Метод Романовского-Гимза

Окраска по Романовскому-Гимза является одним из ос­новных методов при изучении морфологии риккетсий, хламидий, спиро­хет, простейших, а также при исследовании

форменных элементов крови.

Техника. Краситель Романовского-Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Непосредственно перед упот­реблением к 10 мл дистиллированной воды нейтральной реакции прибавляют 10 капель краски и тотчас же наливают на препа­рат, предварительно фиксированный жидким

фиксатором, на один час.

Затем краску сливают, препарат промывают водой, высуши­вают на воздухе и микроскопируют. Окрашивание происходит бы­стрее (30-40 минут), если препарат с краской поместить в термостат при 37С.

К 10 мл дистиллированной воды нейтраль­ной или слабо щелочной реакции непосредственно перед окра­ской препарата прибавляют 10 капель краски и тот час же на­ливают на фиксированный препарат (или погружают

препарат в стаканчик с краской).

Результаты окрашивания зависят от свойства воды,

поэтому следует проверять ее реакцию.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в ро­зово-красный цвет, ядра эукариотических клеток – в красно-фиолетовый, а цитоплазма – в

голубой.

Серебрение по Морозову

1)1 мл ледяной ук­сусной кислоты, 2 мл имеющегося в продаже формалина, 100 мл дистиллированной воды; 2)5 г танина, 1 мл жидкой карбо­ловой кислоты, 100 мл дистиллированной воды; 3)5 г кристаллического нитрата серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, отливают 20 мл в другой со­суд, к оставшимся 80 мл раствора по каплям добавляют рас­твор аммиака, пока не растворится ; если аммиака будет добавлено слишком много, то из отлитых в другой сосуд 20 мл раствора серебра надо добавлять по каплям до получения нужной слабой опалесценции. Для окраски препарата раствор серебра разво­дят дистиллированной водой 1:10.

Техника. Наливают на 1 мин первый реактив, сливают, промывают препарат водой, наливают второй реактив, подогревают на легком пламени до отхождения паров (1 мин), тщательно промывают водой, 1-2 мин при подогревании обраба­тывают препарат третьим реактивом до появления темно-корич­невой окраски мазка, тщательно промывают водой, высушивают. Рассматривают с иммерсионной системой.

Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в буро-черный цвет.

Метод Здродовского

Техника. Препарат тонким слоем наносят на стекло, фик­сируют на пламени и окрашивают разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дважды дистиллиро­ванной воды) в течение 5 минут; затем препарат слегка обес­цвечивают погружением на 1-3 секунды в слабую (0,01%) соля­ную кислоту, промывают водой и докрашивают в течение 30 секунд 1%

раствором водного метиленового синего.

Тонкий мазок фиксируют на пламени горелки. Окраску производят разведенным карболовым фуксином (10-15 капель фуксина на 10 мл дис­тиллированной воды) в течение 5 минут.

Окрашенный препарат промывают водой, а затем обесцвечивают в растворе органиче­ской или минеральной кислоты (0,5% лимонная кислота, 0,01% соляная кислота) в течение 2-3 секунд.

Затем препарат про­мывают водой и докрашивают 0,5% раствором метиленовой синьки в

течение 0,5 минуты.

Микроскопическая картина. Риккетсии окрашиваются в ру­биново-красный цвет, в то время как клетки хозяина обес­цвечиваются кислотой и дополнительно окрашиваются в голубой (протоплазма)

или синий (ядра) цвет (рис.20).

Метод Грея

1) насыщен­ного водного раствора калийных квасцов KО – 5 мл, 20% водного раствора танина – 2 мл и насыщенного водного раствора двухлористой ртути – 2 мл; 2) насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 0,4 мл.https://www..com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

Техника. Протраву наливают на препарат на 8-10 мин, затем промы­вают его дистиллированной водой и окрашивают 5 мин карболо­вым фуксином Циля. Вновь промывают водой, сушат на воздухе и микроскопируют.

Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в крас­ный цвет.

Окраска хламидий

Метод
Романовского-Гимза

Техника
(см. выше).

— “Элементарные тельца” (инфекционные частицы) окрашива­ются краской Гимза в пурпурный

цвет.

— “Первоначальные тельца” (неинфекционные частицы)

окра­шиваются по Гимза в синий цвет.

— Полностью сформировавшиеся зрелые внутриклеточные включения окрашиваются

краской Гимза в пурпурный цвет (рис.21).

Метод Грама

Микроскопическая картина. Окраска по Граму дает вариа­бельные результаты. Поэтому не имеет диагностического

значения.

Окраска водным
разбавленным раствором Люголя

Придает внутриклеточным формам хламидий коричневый цвет из-за

гликогеноподобной оболочки частиц.

Окраска микоплазм

Техника
(см. выше).

https://www..com/watch?v=ytadvertiseen-GB

Микроскопическая картина. Исследование нативных препа­ратов не дает результата. Окрашивают препарат из куль­туры после агаровой фиксации: кусочек среды с колонией по­мещают на предметное стекло и накрывают покровным стеклом с каплей спиртового раствора метиленового синего и азура,

за­тем препарат высушивают.

Окраска спирохет

Методы окраски спирохет делятся на две группы: методы позитивной окраски, когда окрашивается сама клетка, и методы негативной окраски, когда окрашивается фон препарата, а

спирохета остается бесцветной.

Из методов позитивной окраски наиболее

употребителен метод Романовского-Гимза.

Метод
Романовского-Гимза

[attention type=red]

Техника. См. выше. Особенностью техники окрашивания препаратов спирохет является длительность

[/attention]

окраски – в течение 12-15 часов.

Микроскопическая картина. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый, лептоспиры – розово-красный, а боррелии

– сине-фиолетовый цвет.

Ускоренная
модификация Шерешевского

Техника. 15-20 капель красителя Романовского-Гимза разводят в 10 мл 0,5-1% раствора глицерина в воде, разливают в 4-5 пробирок, каждую из которых последовательно нагревают на пламени горелки. Горячий раствор красителя наливают на препарат на 2 минуты, после чего краситель сливают и препарат заливают свежей порцией горячего раствора из следующей пробирки.

Вся окраска занимает 8-10 минут.

Микроскопическая картина. См.

метод Романовского-Гимза.

Окраска разведенным
фуксином

Используется для
окраски боррелий.

Техника.

Реактив: фуксин Циля разводят 1:4 или 1:5. Краситель наносят на фиксированный мазок на 1-2

минуты.

https://www..com/watch?v=ytdeven-GB

Микроскопическая картина. В мазках крови боррелии окрашиваются в розово- красный цвет, эритроциты – в

ярко-красный.

Серебрение по
Морозову

Техника.
См. выше.

Микроскопическая картина. Спирохеты окрашиваются в буро-черный

цвет (рис.22).

Для негативной окраски спирохет используют несколько

методов.

Негативный метод
Бурри

Техника.
См. выше.

Микроскопическая картина. На темно-сером тушевом фоне – бесцветные

клетки.

Негативная
окраска колларголом

Этот метод отличается простотой, доступностью

и хорошей эффективностью.

Техника. На фиксированный мазок наливают на 3 минуты 2% раствор колларгола. После этого препарат ставят в наклонное положение

(водой не смывают) и подсушивают.

Микроскопическая картина. На золотисто-оранжевом фоне отчетливо

контурируется бесцветная спирохета.

Техника.
См. выше.

Окраска простейших

Техника.
См. выше.

Микроскопическая картина. Клеточная цитоплазма окрашивается в голубой цвет, а ядра клеток и жгутики

– в красно-фиолетовый цвет (рис.23).

Метод Райта

Техника.

Реактивы. Способ приготовления: 1% раствор щелочного метиленового синего на 0,5% растворе двууглекислого натрия наливают в сосуд таким образом, чтобы высота слоя жидкости не превышала 6 см, и нагревают при 100 С в течение часа. Затем жидкость охлаждают и фильтруют. Охлажденный фильтрат в тонком слое при искусственном освещении

должен иметь пурпурно-красный оттенок.

https://www..com/watch?v=playlist

На сухой нефиксированный мазок наливают несколько капель красителя. Спустя 1 минуту прибавляют столько же капель дистиллированной воды. Через 2-3 минуты препарат промывают в воде около 0,5 минуты, пока он в тонком слое не приобретет

розоватого оттенка.

Микроскопическая картина. Ядра простейших окрашиваются в вишнево-красный цвет, цитоплазма – в

голубоватый, жгутики – в красный цвет.

Окраска по Шенку

Протраву, состоящую из двух растворов, гото­вят за 7-10 дней до употребления. Первый раствор состоит из 30 мл насыщенного водного раствора танина и 10 мл 5% вод­ного , второй – из 1 мл анилина и 4 мл 95% спирта.

Техника. На препарат наносят 8 капель первого и 1 каплю второго раствора. После того как избыток протравы сливают, на п­репарат наносят краску (без промывания). Красить можно 1% сафранином в 50% спирте или метиленовым синим Леффлера. Хо­рошие результаты можно получить, применив для окраски смесь 30 мл метиленового синего Леффлера и 8 мл второго раствора протравы.

Микроскопическая картина. Жгутики приобретают синий цвет.

Метод Петрука

Метод Петрука – модификация метода Грея.

Вме­сто карболового фуксина применяют нитрат серебра, раствор которого готовят следующим образом: 1 г АgNОз растворяют в 2 мл дистиллированной воды, к нему по каплям добавляют 5% рас­твор аммиака до растворения образовавшегося осадка и появле­ния легкой опалесценции. Этот исходный раствор разбавляют в 10 раз дистиллированной водой и применяют для окраски. Пре­парат с нанесенным на него раствором нитрата серебра слегка подогревают над пламенем.

Микроскопическая картина. Жгутики окрашиваются в желто-коричневый цвет.Окраска включений в бактерияхОкраска метахроматических зерен (волютина)

Волютин является запасным полифосфатом у некоторых видов бактерий, Его наличие и расположение в клетке может иметь диагностический характер, например, у коринебактерий дифтерии (тельца Бабеша-Эрнста).

Метод Нейссера

Способ 1.

Приготовление краски Нейссера: а) метиленового синего 0,1 г, 95% спирта 2 мл, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл; б) раствор хризоидина, или везувина, или бисмаркабраун красителя 1 г, дистиллированной воды 300 мл. Краситель растворяют в кипящей воде и фильтруют через бу­магу.

Техника. Препараты выдерживают по 1 минуте в растворе метиленового синего и в растворе Люголя. Промывают водой. Докрашивают раствором хризоидина (или везувина, или бисмаркбраун) 1-3 мин. Промывают водой.

Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна Бабеша-Эрнста – в темно-синий.

Способ 2.

Раствор 1:

  • Метиленового синего – 0,1 г
  • Этилового спирта 95 – 2 мл
  • Ледяной уксусной кислоты – 5 мл
  • Дистиллированной воды – 100 мл

Раствор 2:

  • Кристаллвиолета – 1 г
  • Этилового спирта 95 – 10 мл
  • Дистиллированной воды – 300 мл

Для окраски смешивают две части раствора 1 с одной ча­стью раствора 2.

Техника окраски. На фиксированный мазок наливают смесь растворов 1 и 2, через минуту краску сливают и мазок обрабатывают раствором Люголя в течение минуты, затем про­мывают водой, докрашивают в течение 2-3 минут раствором хризоидина (1 г краски в 300 мл дистиллированной горячей воды), промывают водой и высушивают.

https://www..com/watch?v=ytcreatorsen-GB

Микроскопическая картина. Тела бактерий окрашиваются в светло-желтый цвет, зерна волютина (Бабеша-Эрнста) – в темно-синий (рис.19).

Источник: http://amedclinic.ru/blog/serebrenie-po-morozovu/

Цвет бактерий, грамположительные и грамотрицательные бактерии

Метод леффлера

Микроорганизмы в своем нативном состоянии не видны не только в оптические, но и в электронные микроскопы. Причиной подобного явления является их прозрачность – ткани микроорганизма имеют коэффициент преломления света подобный стеклу.

Для изучения прокариотов под микроскопом используются различные методы окрашивания, что дает возможность придать цвет бактериям или их частям. Кроме того, микробы обладают тинкториальными свойствами – важной особенностью, состоящей в неодинаковом взаимодействии различных тканей прокариота с красителем.

Окрашивание бактерий

Способов придать цвет микроорганизмам много.

В зависимости от предмета окрашивания используемые для этого методики подразделяют на:

  • позитивные способы, окрашивающие ткани микроорганизмов;
  • негативные методы – окрашивающие пространство вокруг бактерии, в результате чего она становится видна как силуэт на окрашенном фоне.

Как позитивное окрашивание, так и негативное делятся в зависимости от состояния микроорганизма на:

  • витальное (прижизненное) окрашивание – чаще всего применяются слабые растворы метиленового синего, конго красного и толуоидинового синего;
  • поствитальное (фиксированное) окрашивание.

Окрашивание фиксированных образцов наиболее эффективный способ придания бактерии цвета. В зависимости от необходимого результата применяют простые или сложные методы окрашивания.

Простое окрашивание

Так, простые методы поствитального окрашивания бактерии позволяют получить информацию о том, какого размера и формы микроорганизм, установить локализацию и взаимное расположение отдельных прокариотов.

Для придания цвета бактериям обычно используют растворы щелочного метиленового синего или фуксина Пфейфера. Методологически способ несложен: раствор красителя наносится на фиксированный препарат и выдерживается, согласно методике, от 1 до 5 минут, после чего окрашенный образец промывают  (водой) и сушат. Препарат готов, и можно проводить микроскопические исследования.

Комбинированные (сложные) методы окрашивания

При более глубоких исследованиях применяются сложные способы окрашивания фиксированных образцов. Сложные методы придания цвета микроорганизмам подразумевают воздействие на  исследуемый препарат несколькими окрашивающими реагентами, один из которых называют основным, а остальные – дополнительными. Также используются различные обесцвечивающие агенты:

  • кислоты (серная, соляная в различных разбавлениях);
  • спирты (в основном этиловый);
  • ацетон и другие.

Сложные методы окраски позволяют выявить структуру микроорганизма, иные свойства и особенности бактерии.

Наиболее распространенными методами придания цвета фиксированным препаратам являются следующие:

  • метод Грама;
  • методика  Циля-Нельсона;
  • метод Пешкова;
  • окрашивание по Романовскому-Гимзе.

Окраска по Граму

Методика  окрашивания бактерий, предложенная в 1884 году Г. Грамом, получила широкое распространение  и имеет большое значение  для систематики микроорганизмов и  диагностики инфекционных болезней.

Метод Грама основан на биохимических свойствах клеточной стенки прокариотов; он позволяет разделить все микроорганизмы на 2 группы:

  • грамположительные – в результате окрашивания приобретают устойчивый синий цвет;
  • грамотрицательные – обесцвечиваются при промывании, после контрастного окрашивания красителем красного цвета приобретают цвет от красного до розового.

При окрашивании по Граму используют анилиновые красители – метиловый фиолетовый и генциановый – с последующей фиксацией красителя йодом. Окрашенный образец промывают спиртом, после чего получают 2 группы:

  • микроорганизмы, окрашенные в синий цвет, – грамположительные;
  • обесцвеченные бактерии – грамотрицательные.

Обесцвеченные грамотрицательные микроорганизмы обрабатывают красным красителем (сафранин или фуксин), окрашивающим их в цветовом интервале красный – розовый.

Было установлено, что окраска выявляет наличие у грамотрицательных микроорганизмов внешней мембраны, не позволяющей красителю проникнуть в клетку.

К грамположительным бактериям относятся почти все кокки и спорообразующие бациллы, а к грамотрицательным – большая часть неспороносных микробов.

Окраска по Цилю-Нельсену

Данная методика поствитального окрашивания, предложенная немецкими медиками Ф.Цилем и Ф.Нельсоном в1883 г., позволяет определить в пробе кислотоустойчивые бактерии, в частности возбудителей лепры, туберкулеза и микобактериоза.

Методика придания цвета микробам основана на присутствии в клетках кислотоустойчивых прокариотов оксикислот, липидов и воска, что является причиной неудовлетворительного окрашивания разведенными красителями.

При окрашивании по Цилю-Нельсону фиксированный препарат обрабатывают карболовым фуксином Циля и подогревают над горелкой до появления паров, охлаждают и повторяют процесс 3 раза.

[attention type=green]

По завершении  препарат промывают водой, обесцвечивают раствором серной или соляной кислот и тщательно промывают.

[/attention]

Далее препарат в течение 1 минуты обрабатывают раствором метиленового синего, промывают водой и высушивают.

В результате цвет кислотоустойчивых микроорганизмов – интенсивно красный, на фоне остальной микрофлоры, имеющей светло-синюю окраску.

При необходимости дифференцировать бактерии лепры от возбудителя туберкулеза применяется метод Семеновича-Марциновского:

  • бактерии лепры окрашиваются в голубой цвет;
  • возбудители туберкулеза – бесцветные.

Метод Пешкова

Окраска по Пешкову проводится для выявления эндоспор грамположительных бактерий. Используют жидкость Карнуа, метиленовый синий, фуксин по Пфейферу (или нейтральный красный).

Результат окрашивания по Пешкову прекрасно микроскопируется:

  • зрелые эндоспоры становятся голубыми;
  • молодые эндоспоры – насыщенно-синие;
  • цитоплазма приобретает красный цвет;
  • хроматин – зерна приобретают фиолетовую окраску.

Окраска микроорганизмов по Романовскому-Гимзе

Метод обеспечивает окрашивание ацидофильных бактерий в разные оттенки красного, а базофильных – в цветовой гамме от пурпура до синего. Методика имеет большое практическое значение при определении паразитов крови (спирохета) – цитоплазма микроорганизмов окрашивается в голубой цвет, а клетки, содержащие ядра, – в красно-фиолетовый.

Окраска по Леффлеру

Метод окраски по Леффлеру позволяет получить зримую картину жгутиков бактерий путем последовательного применения танина и красителя. Также наличие жгутиков может выявить окраска по Морозову:

  • обрабатывают препарат кислотой, при этом жгутики и оболочки разрыхляются;
  • протравливают танином;
  • окрашивают азотнокислым серебром – жгутики и оболочка покрываются толстым слоем препарата и приобретают цвет в гамме от желтого до насыщенно-коричневого.

Кроме того, Леффлер разработал методику окраски дифтерийных бактерий метиленовым синим Леффлера (готовят из спиртового раствора метиленового синего, слабого раствора щелочи и дистиллированной воды). В результате обработки бактериальная палочка приобретает голубой цвет, а гранулы волютина дифтерийных бактерий окрашиваются в темно-синий.

Помимо жгутиков, методики окраски бактерий позволяют определить наличие капсул, для чего применяется методика Бурри-Гинса: последовательная обработка препарата разведенной тушью, спиртом, фуксином Пфейфера. После чего образец промывается водой и высушивается.

Капсулы выглядят как светлые ореолы, расположенные вокруг красных бактерий на темном фоне.

Естественная окраска колоний микроорганизмов

Существует целая группа микроорганизмов, называемая хромогенными бактериями, колонии которых как в природе, так и на искусственных средах окрашены ярко и разнообразно. Цветовая гамма представлена от нежно-лимонного до густого темно-синего и даже черного. Хромогенных бактерий множество – это и кокки, и палочки, и спириллы. Химический состав красителей тоже очень разнообразен.

Независимо от цвета колонии все хромогенные бактерии совершенно бесцветны, окраску обеспечивают капельки, кристаллики или зернышки, расположенные вне клеток и являющиеся отходами жизнедеятельности бактерий. Эти отходы могут растворяться и диффундировать в окружающую среду, что приводит к окрашиванию пространства колонии.

Понятие «хромогенные бактерии» появилось в 1872 году благодаря Ф. Кону. Было выявлено,  что бактерии, обладающие способностью к хромогенезу, не являются естественной, а лишь сборной группой, которую объединяет только способность окрашивать среду.

Неоднократно были предприняты попытки классификации хромогенных бактерий, однако успешных предложено не было.

Сегодня применяется классификация, основанная на растворимости пигмента:

  • пигмент водорастворим;
  • пигмент не растворяется в воде, но растворяется в спирте;
  • нерастворимый ни в воде, ни в спирте пигмент.

Данная классификация несовершенна, что объясняется недостатком информации как по природе пигмента, так и по самой функции хромогенеза.

Хромогенных бактерий известно уже очень много, а сортов красителей, которые они производят, намного меньше. Это объясняется тем, что различные хромогенные бактерии производят один и тот же пигмент.

Все бактериальные пигменты делят на 3 большие группы:

  • липохромы;
  • продигиозин;
  • бактериофлуоресцин.

Липохромы

Колонии, выделяющие липохромы, окрашены в цвета от желтого до красного. К ним относятся почти все кокки и в меньшей степени палочки.

Физико-химические свойства пигмента:

  • агрегатная форма – кристаллики;
  • нерастворим в воде;
  • растворим в органических растворителях (спирт, бензин, эфир, сероуглерод и др.);
  • омыляется горячей щелочью;
  • с концентрированной серной кислотой дает синее окрашивание – липоциановая реакция Цопфа. 

Продигиозин

Бактерии, выделяющие красный пигмент продигиозин, известны с давних времен как бактерии «чудесной крови».

О них упоминал Пифагор, запрещая своим ученикам есть вареные бобы, которые простояли ночь – на них могла появиться «кровь». В Средние века замечали появление «чудесной крови» на продуктах, когда сначала появляются небольшие кровавые капельки, которые очень быстро растут и прямо заливают продукты кровавым слоем.

Появление «чудесной крови» отмечалось на богатых крахмалом продуктах – хлебе, рисе, поленте, вареном картофеле, бывает на мясе или отварных яйцах, но достаточно редко. Может развиться на молоке, тогда слой сливок окрашивается в красный цвет, а само молоко быстро створаживается.

Бактерии «чудесной крови» не являются патогенными, однако некоторые продукты их жизнедеятельности – токсальбумины – обладают токсическими свойствами.

Физико-химические свойства пигмента:

  • жидкость;
  • малорастворим в воде;
  • растворяется в органических растворителях (спирты, эфир, хлороформ, сероуглерод и другие);
  • при взаимодействии со щелочами образуется оранжево-желтая краска;
  • при воздействии кислот образуется карминовая и далее – фиолетовая краска;
  • солнечный цвет разрушает пигмент в растворах.

Бактериофлуоресцин

Флуоресцирующий пигмент вырабатывают маленькие бактерии-палочки, подвижные за счет жгутика на одном конце, все они не образуют спор.

Большая часть бактерий является сапрофитами и имеет широкий ареал обитания. Колонии обнаруживают зелено-травяную флуоресценцию.

Физико-химические свойства пигмента:

  • в чистом виде не выделен, предположительно является белковым веществом;
  • водорастворим;
  • не растворяется в спиртах, эфирах и бензине;
  • концентрированный раствор имеет бледно-желтый цвет и флуоресцирует голубым цветом;
  • обработка щелочью сдвигает флуоресценцию в зеленый цвет;
  • при добавлении кислоты флуоресценция прекращается.

Кроме трех основных пигментов, были выделены пиоцианин (синий), пиоксантин (красно-бурый), синцианеин (синий) и другие.

Одни бактерии образуют пигмент всегда, другие микроорганизмы выделяют пигмент иногда. Есть бактерии, которые всегда выделяют только один пигмент, а есть бактерии, выделяющие несколько различных пигментов.

Хромобактерии изучены недостаточно хорошо, не выявлены причины, от которых зависит потеря хромобактериями способности выделять пигмент. Такие колонии называют лейкорасой. Однако при дальнейших посевах лейкораса может дать нормальное окрашивающее потомство.

Изучение способности бактерий к хромогенезу представляет большое не только научное, но и практическое значение.

[attention type=yellow]

Образование высшее филологическое. В копирайтинге с 2012 г., также занимаюсь редактированием/размещением статей. Увлечения — психология и кулинария.

[/attention]

Источник: https://probakterii.ru/prokaryotes/raznoe/cvet-bakterij.html

Медицинская энциклопедия – значение слова Леффле́ра Метод Окра́ски

Метод леффлера

(F.A.J. Loeffler, 1852—1915, нем. бактериолог) 1) окраска жгутиков бактерий путем последовательного применения протравы (танина) и красителя;

2) окраска дифтерийных бактерий метиленовым синим Леффлера.

Смотреть значение Леффле́ра Метод Окра́ски в других словарях

Метод — м. и метода ж. способ, порядок, основания; принятый путь для хода, достижения чего-либо, в виде общих правил. -дический, порядочный, правильный, основательный, постепенный;……..
Толковый словарь Даля

Метод — (нов. офиц.). Сокращение, употр. в новых сложных словах в знач. методический, напр. методбюро.
Толковый словарь Ушакова

Метод М. И Устар. Метода Ж. — 1. Способ познания, подход к изучению явлений природы и общественной жизни. 2. Прием, система приемов в какой-л. области деятельности.
Толковый словарь Ефремовой

Метод… — 1. Начальная часть сложных слов, вносящая значение сл.: методический (методбюро, методкабинет, методобъединение и т.п.).
Толковый словарь Ефремовой

Аналитический Метод Прогнозирования — Метод прогнозирования, основанный на получении экспертных оценок путем логического анализа прогнозной модели.
Политический словарь

Бихевиоральный Метод — (от англ. “бихевиор” – поведение) – в политологии предполагает исследование политических явлений и процессов через анализ поведения индивидов и групп при исполнении……..
Политический словарь

Дельфийский Метод, Метод Делфи — Метод коллективной экспертной оценки, основанный на выявлении согласованной оценки экспертной группы путем их автономного опроса в несколько туров, предусматривающего……..
Политический словарь

Матричный Метод Прогнозирования — Метод прогнозирования, основанный на использовании матриц, отражающих значения (веса) вершин граф-модели объекта прогнозирования, с последующим преобразованием матриц……..
Политический словарь

Метод — – средство анализа, способ проверки и оценки знания.
Политический словарь

Метод Деструктивной Отнесенной Оценки — Метод коллективной генерации идей, реализуемый посредством двух разнесенных во время сессий, первая из которых полностью подчиняется правилам коллективной генерации……..
Политический словарь

Метод Индивидуальной Экспертной Оценки — Метод прогнозирования, основанный на использовании в качестве источника информации одного эксперта.
Политический словарь

Метод Интервью — Метод индивидуальной экспертной оценки, основанный на беседе эксперта с прогнозистом по схеме “вопрос — ответ”.
Политический словарь

Метод Исторической Аналогии — Метод прогнозирования, основанный на установлении и использовании аналогии объекта прогнозирования с одинаковым по природе объектом, опережающим первый в своем развитии.
Политический словарь

Метод Коллективной Генерации Идей — Метод коллективной экспертной оценки, основанный на стимулировании творческой деятельности экспертов путем совместного обсуждения конкретной проблемы, регламентированного……..
Политический словарь

Метод Коллективной Экспертной Оценки — Метод прогнозирования, основанный на выявлении обобщенной объективированной оценки экспертной группы путем обработки индивидуальных, независимых вынесенных……..
Политический словарь

Метод Математической Аналогии — Метод прогнозирования, основанный на установлении аналогии математических описаний процессов развития различных по природе объектов с последующим использованием……..
Политический словарь

Метод Построения Прогнозного Сценария — Аналитический метод прогнозирования, основанный на установлении логической последовательности состояний объекта прогнозирования и прогнозного фона во времени при……..
Политический словарь

Метод Прогнозирования — Способ исследования объекта прогнозирования, направленный на разработку прогнозов. Примечание. Методы прогнозирования являются основанием для методик прогнозирования.
Политический словарь

Метод Психо-интеллектуальной Генерации Идей — Метод индивидуальной экспертной оценки, при котором выявление экспертной оценки осуществляется с помощью программированного управления, включающего обращение к……..
Политический словарь

Метод Управляемой Генерации Идей — Метод коллективной генерации идей с использованием целенаправленного интеллектуального воздействия (усиливающего или подавляющего) на процесс генерации идей.
Политический словарь

Метод Эвристического Прогнозирования — Аналитический метод прогнозирования, состоящий в построении и последующем усечении дерева поиска экспертной оценки с использованием какой-либо эвристики.
Политический словарь

Метод Экспертных Комиссий — Метод коллективной экспертной оценки, состоящий в совместной работе объединенных в комиссию экспертов, разрабатывающих документ о перспективах развития объекта прогнозирования.
Политический словарь

Опережающий Метод Прогнозирования — Метод прогнозирования, основанный на использовании свойства научно-технической информации опережать реализацию научно-технических достижений в общественной практике.
Политический словарь

Патентный Метод Прогнозирования — Опережающий метод прогнозирования, основанный на оценке (по принятой системе критериев) изобретений и исследовании динамики их патентования.
Политический словарь

Публикационный Метод Прогнозирования — Опережающий метод прогнозирования, основанный на оценке публикаций об объекте прогнозирования (по принятой системе критериев) и исследовании динамики их публикования.
Политический словарь

Синоптический Метод — Метод прогнозирования, основанный на анализе экспертами известного множества прогнозов объекта прогнозирования и прогнозного фона с последующим их синтезом.
Политический словарь

Системный Метод В Политологии — – рассмотрение политики как целостного, сложно организованного, саморегулирующегося механизма, находящегося в непрерывном взаимодействии с окружающей средой.
Политический словарь

Сравнительный Метод В Политологии — – сопоставление однотипных политических явлений и процессов и выявление их общих черт и специфики с целью нахождения оптимальных форм политической организации или путем решения задач.
Политический словарь

Статистический Метод Прогнозирования — Фактографический метод прогнозирования, основанный на построении и анализе динамических рядов характеристик объекта прогнозирования.
Политический словарь

Фактографический Метод Прогнозирования — Метод прогнозирования, базирующийся на использовании источников фактографической информации.
Политический словарь

Посмотреть в Wikipedia статью для Леффле́ра Метод Окра́ски

Источник: http://slovariki.org/medicinskaa-enciklopedia/15301

Как выявить синдром Леффлера | Справочник медицинской лаборатории Оптимум (Сочи, Адлер)

Метод леффлера

Cиндром Леффлера является аллергической болезнью, происходящей вследствие увеличения эозинофилов у пациента в крови. Впоследствии может возникнуть пневмония в легких. 

Врачи различают два синдрома заболевания:

В большинстве случаев заболеванием страдают по достижении подросткового возраста и старше. Болезнь быстрей всего развивается в жарком климате и активно прогрессирует. Часто синдром Леффлера появляется у людей, склонных к аллергии и повышенному порогу чувствительности. 

Причины развития синдрома Леффлера

Выделяется несколько причин возникновения заболевания:

  • аллергены в природе;
  • лекарственные средства;
  • бактерии;
  • паразиты;
  • невыясненные причины. 

В основном заболевание можно выявить только после длительного контакта с аллергенами в течение нескольких лет. После ликвидации контакта симптоматика проходит быстро или развиваются осложнения в виде второй стадии синдрома. 

Здоровые люди могут заразиться синдромом Леффлера после контакта с больным человеком посредством:

  • еды;
  • рукопожатия;
  • предметов личной гигиены. 

При попадании в кровь бактерии оказываются в организме человека. Также можно заразиться воздушно-капельным путем. 

Симптомы заболевания и первые признаки

Обычно симптом Леффлера не имеет симптомов во время развития. Иногда может проявляться сухой или мокрый кашель с кровянистыми выделениями. Также появляется температура. 

Дополнительными симптомами заболевания могут быть:

  • спазмы в бронхах;
  • сухая хрипота в верхних дыхательных путях;
  • повышение количества лейкоцитов в крови;
  • инфильтрация легочных тканей;
  • одышка;
  • пятна на кожных покровах;
  • лихорадка. 

Методы диагностики

Специалист может быстро обнаружить заболевание, ведь в крови пациента высокое содержание эозинофилов. Однако могут возникнуть определенные сложности по причине таких симптомов:

  • аллергические реакции;
  • неблагоприятные условия жизни;
  • обострение сезонной аллергии и проявления астмы;
  • генетическая расположенность.

Когда имеются подозрения на другие болезни, специалист направляет пациента на обследование к другим врачам. 

Если существует подозрение на синдром Леффлера, то следует обязательно провести исследования в лаборатории:

  • общий анализ мокроты может показать наличие эозинофилов и кристаллов Шарко-Лейдена;
  • общий анализ крови выявляет эозонофилы;
  • часто в крови можно обнаружить большое содержание IgE, иногда до 1000 МЕ/мл.

Также существуют и другие способы диагностики:

  • проведение кожных тестов для обнаружения возбудителя заболевания (врач имеет право назначить назальные средства или ингаляции);
  • анализ кала для выявления гельминтов и яиц паразитов с учетом цикла развития и времени со дня заражения;
  • серологические тесты с реакцией связывания комплемента и реакции преципитации;
  • применение клеточного тестирования на реакцию дегрануляции тучных клеток с определенными аллергенами, реакцию дегрануляции базофилов по Шелли, для выявления специфических IgE при помощи радиоаллергосорбентных тестов и ИФА.

Лечение

Нередко может случиться самостоятельное и неожиданное выздоровление пациента без соответствующего лечения. Это происходит в случае избавления от паразитов в организме.

Следует провести дегельментизацию, пропить средства против паразитов, которые может назначить только специалист.

Если болезнь продолжает прогрессировать, то следует пропить антигистаминные препараты, которые будут подавлять выделенные организмом образования. 

Крайне важно не заниматься самолечением, нужно обязательно обратиться к специалисту при обнаружении симптомов!

Профилактические меры

Для профилактики синдрома Леффлера желательно периодически обращаться к аллергологу и другим врачам, проходить обследование. Важно следить за гигиеной, как можно меньше общаться с животными, в особенностями дворовыми. 

Также следует приобрести стандартные лекарственные средства для профилактики аллергии на лекарства. 

Синдром Леффлера не считается особо опасным заболеванием, его можно вылечить быстро и легко, если пациент будет выполнять все рекомендации врача и соблюдать правила гигиены. В противном случае болезнь может спровоцировать неприятные осложнения, пневмонию и бронхиальную астму, от которых будет сложно избавиться.

Источник: https://analizy-Sochi.ru/zabolevaniya/cindrom-lefflera.html

Медик
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: